Con el mtodo de Sanger se determina el grupo -amino libre de las cadenas polipeptdicas, este reacciona, con el 1fluoro-2,4-dinitrobenceno [DNFB] en un medio ligeramente alcalino, formando los DNP derivados. Una hidrlisis posterior con HCl 6N aplicando temperatura y presin provee los aminocidos libres y dinitrofenil derivados, estos derivados pueden extraerse del hidrolizado con ter e identificarse con una cromatografa en papel.
Utilizar el mtodo de Sanger para identificar los aminocidos que contienen el grupo alfa-amino terminal de las cadenas de la molcula de hemoglobina. Se acidifico el medio con HCl 3N para detener la reaccin del DNFB con la hemoglobina en medio alcalino que realizamos anteriormente, se extrajo con ter para separar en dos fases, la orgnica que es nuestra sustancia problema que contiene aminocidos dinitrofelinados, y la etrea la cual hace que se eliminen los residuos del DNFB que no reaccionaron en la etapa anterior de nuestra reaccin, posteriormente se agreg HCl 6N para realizar una hidrolisis acida, que al aplicar temperatura y presin en el autoclave esta provee que los aminocidos libres y dinitrofenil derivados puedan extraerse del hidrolizado.
Para identificar y separar el grupo amino terminal de la hemoglobina, se utilizo el extracto obtenido en la hidrolisis y con ter se extrajo nuestra sustancia problema calentamos los extractos etreos en una parrilla con el fin de evaporar el ter que hay en nuestra sustancia para que nuestro problema estuviera concentrado y sin residuo alguno de las sustancias anteriores que utilizamos, disolvimos en alcohol absoluto para la aplicacin en cromatografa nuestro DNPproblema, que es el grupo amino terminal de la hemoglobina.
En donde se colocaron estos estndares [DNP-derivados]. Al revelar el cromatograma se encontraron dos manchas en la corrida del problema, uno correspondiente al DNP-Valina y el otro corresponde al DNFB sin reaccionar. Hubo unas ligeras diferencias entre la corrida del problema y de los DNPderivados. Estas diferencias se pueden deber a la temperatura ambiente la cual hace que acelere o sea ms lento cuando el cromatograma corre en el disolvente.
Adems el problema presento DNFB, lo cual se debe a los restos de DNFB que se quedaron en la muestra debido a que no se extrajo en su totalidad antes de la hidrlisis que se hizo con el fin de eliminar todo este exceso. Enrique Battaner Arias, Biomoleculas 1ra. Ediciones Universidad de Salamanca. Cerrar sugerencias Buscar Buscar. Saltar el carrusel.
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Lo que nos queda al final son unas bandas definidas en cada una de las columnas, eso con suerte. Porque sabemos que, dado el ddNTP que introdujimos en ese tubo, esa secuencia que ha producido esa banda termina en adenina.
La siguiente banda puede estar en la misma columna o cambiar, por ejemplo, a una citosina. Esa es la secuencia complementaria a la original, por lo que tenemos que hacer la complementaria de la obtenida para conseguir la original. See author's posts. Facebook Twitter.
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